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一、 實(shí)驗(yàn)原理

染色體免疫共沉淀是基于體內(nèi)分析發(fā)展起來(lái)的方法，也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法，在過(guò)去十年已經(jīng)成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。

基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過(guò)對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。

二、應(yīng)用簡(jiǎn)介

核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動(dòng)的生長(zhǎng)、繁殖、運(yùn)動(dòng)、遺傳和代謝等生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，ChIP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。

染色質(zhì)免疫共沉淀可應(yīng)用于：（1）組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標(biāo)記”；（2）轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析；（3）藥物開(kāi)發(fā)研究；（4）DNA損失與凋亡分析。

三、實(shí)驗(yàn)方法

甲醛處理細(xì)胞——收集細(xì)胞，超聲破碎——加入目的蛋白的抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合——加入ProteinA，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀——對(duì)沉淀下來(lái)的復(fù)合物進(jìn)行清洗，除去一些非特異性結(jié)合——洗脫，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物——解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷——PCR分析。

四、樣本送檢要求 

五、案例展示  

六、常見(jiàn)問(wèn)題

1、消化的染色質(zhì)濃度過(guò)低。

2、染色質(zhì)消化不足且片段過(guò)大（大于900 bp）。

3、樣品輸入對(duì)照組PCR反應(yīng)中無(wú)產(chǎn)物或產(chǎn)物很少。

4、陽(yáng)性對(duì)照組蛋白H3-IP RPL30 PCR反應(yīng)中無(wú)產(chǎn)物。

5、陰性對(duì)照Rabbit IgG-IP和陽(yáng)性對(duì)照Histone H3-IP PCR反應(yīng)中產(chǎn)物的數(shù)量相等。

七、服務(wù)流程